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肉苁蓉苯乙醇糖苷分离纯化研究; Study on the separation and purification of phenvlethanoid glycosides from Cistanche deserticola Y.C.Ma
董贝涛
学位类型硕士
导师赵兵 ; 袁晓凡
2015-05
学位授予单位中国科学院研究生院
学位专业生物化工
关键词肉苁蓉 苯乙醇糖苷 分离纯化 双水相 柱层析
摘要本论文主要研究了传统中药材荒漠肉苁蓉中苯乙醇糖苷类成分的分离纯化新工艺,利用超声辅助双水相提取、大孔树脂扩张床吸附分离及聚酰胺树脂、反相硅胶及葡聚糖凝胶等柱层析技术,探索荒漠肉苁蓉苯乙醇糖苷更加高效的、且具有规模化生产潜力的制备方法,并为植物天然活性产物分离纯化领域提供新的研究与应用经验。 通过单因素实验,研究了超声辅助双水相提取中硫酸铵与乙醇质量分数、超声功率、提取温度、液固比及提取时间等因素对苯乙醇糖苷提取效果的影响。在单因素实验结果的基础上,固定液固比30/1、提取温度30℃、超声提取时间40 min和超声功率300 W,以硫酸铵质量分数、乙醇质量分数和提取时间为变量,以松果菊苷和毛蕊花糖苷的总提取产率为响应值进行响应面优化实验,得到了最优提取工艺,即硫酸铵质量分数为23.5%,乙醇质量分数为20%,液固比为30/1,提取温度30℃,提取时间37 min,超声功率300 W,此时荒漠肉苁蓉苯乙醇糖苷的提取产率最大,其中松果菊苷的提取产率为5.35 mg/g,毛蕊花糖苷提取产率为6.22 mg/g,对应的提取率达到86.7%(松果菊苷)和92.4%(毛蕊花糖苷)。此外,超声辅助双水相提取分离得到的苯乙醇糖苷产物抗氧化活性亦高于其他方法得到产物的活性,说明该方法能够较好地保存苯乙醇糖苷活性并且提升提取率与产品质量。 本研究选用大孔树脂扩张床吸附分离技术以避免固定床层析易堵塞的问题。其中大孔树脂采用HPD300型,采用下部进样的方式,控制上样液(图1.3中产物2)松果菊苷浓度为1.0 mg/ml,采用等密度甘油水溶液进行平衡及稳定扩张比(1.5左右),采用1 BV/h(Bed volume per hour)流速上样,上样6.1 BV(Bed volume),保持扩张比(1.5左右),上样后采用3 BV去离子水除杂,最后采用3 BV 50%乙醇溶液以固定床方式洗脱目标产物,干物质中松果菊苷含量可达92.6 mg/g,毛蕊花糖苷含量为60.3 mg/g,两者总回收率达到88%。该方法避免了固定床层析的堵塞问题,产品纯化效果好(两苷总纯度15.29%),并为大孔树脂在苯乙醇糖苷生产过程中的应用提供了新的思路。 本研究采用聚酰胺树脂对大孔树脂固定床产物(图1.3中产物4)进一步纯化,采用硅胶C18和LH-20葡聚糖凝胶柱层析逐级精制获得高含量的苯乙醇糖苷色谱纯单体。聚酰胺层析中采用含2.43 mg/ml松果菊苷的上样液,以1 BV/h的速度上样(共2.1 BV)、用3 BV去离子水以2 BV/h的速度除杂、8 BV 30%乙醇以2 BV/h的速度洗脱,得到了高含量的苯乙醇糖苷干品(松果菊苷210.9 mg/g, 毛蕊花糖苷119.9 mg/g),总回收率达到95.5%。研究还发现采用聚酰胺树脂进一步纯化获得的苯乙醇糖苷总苷在抗氧化活性上亦强于大孔树脂总苷产物。聚酰胺树脂纯化产物按极性分成四个组分(其中松果菊苷、毛蕊花糖苷在各自组分中含量达到50%以上),分别通过硅胶C18层析柱并采用不同含量甲醇溶液洗脱,共得到6种相应的色谱纯苯乙醇糖苷单体,液相检测各单体的纯度及回收率均达到90%以上。各单体产物再采用葡聚糖凝胶柱进一步精制,采用50%甲醇溶液洗脱,精制后6种单体的纯度均达到95%以上,回收率达到90%以上。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.ipe.ac.cn/handle/122111/20294
专题研究所(批量导入)
推荐引用方式
GB/T 7714
董贝涛. 肉苁蓉苯乙醇糖苷分离纯化研究, Study on the separation and purification of phenvlethanoid glycosides from Cistanche deserticola Y.C.Ma[D]. 中国科学院研究生院,2015.
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