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口蹄疫灭活病毒疫苗分离纯化工艺研究; Purification strategy of inactivated Foot-and-Mouth Disease Virus
李浩
学位类型硕士
导师苏志国 ; 张松平
2015-05
学位授予单位中国科学院研究生院
学位专业生物化工
关键词口蹄疫灭活病毒疫苗 分离纯化 疏水色谱 离子交换色谱 凝胶过滤色谱
摘要口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物急性传染病,近年来,口蹄疫疫情在世界范围内造成了极其严重的经济损失。目前,疫苗接种是唯一能够控制口蹄疫疫情的方法,但疫苗的生产工艺尚存在一些问题。口蹄疫疫苗的分离纯化方法尚停留在活病毒提取阶段,选择性差,产品纯度较低,难以适应新型灭活病毒疫苗的生产需要。针对以上问题,本论文尝试建立一种能够适用于工业生产的新型色谱分离纯化工艺,主要包括以下内容: (1)筛选了离子交换色谱以及凝胶过滤等分离介质,得到了分离效果较好的色谱介质;并通过合理组合建立了Sephacryl-S400凝胶过滤色谱偶联DEAE Sepharose FF离子交换色谱的纯化工艺。该工艺口蹄疫灭活病毒的纯化倍数达到217倍,收率为37.5%。 (2)筛选了疏水层析色谱以及凝胶过滤等分离介质,得到了分离效果较好的色谱介质;根据介质筛选结果,建立了Butyl Sepharose 4FF疏水色谱结合Superdex 200凝胶过滤色谱的纯化工艺,该工艺口蹄疫灭活病毒的纯化倍数达到247倍,口蹄疫病毒的收率为75.4%,宿主DNA的去除率达到99.5%。 (3)运用多种检测方法对病毒灭活病毒纯品的结构和形态进行鉴定,通过凝胶过滤高效液相色谱偶联多角度激光散射仪检测其分子量,发现完整的病毒的分子量为5.6*107 Da;同时波长扫描发现其最大吸收波长为259nm,均与文献报道一致;通过激光粒度仪进一步对口蹄疫灭活病毒的直径进行检测,发现其直径为28nm;透射电镜观察结果表明,口蹄疫灭活病毒为30 nm左右的球形颗粒,其形态大小与通过蔗糖密度梯度离心所制备的标准品一致。 本论文建立了新型口蹄疫灭活疫苗的分离纯化工艺,该工艺具有能耗少、回收率高、适合工业应用的特点,同时所得口蹄疫灭活疫苗产品的纯度高,结构完整;为大规模制备口蹄疫灭活病毒疫苗奠定了基础。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.ipe.ac.cn/handle/122111/20302
专题研究所(批量导入)
推荐引用方式
GB/T 7714
李浩. 口蹄疫灭活病毒疫苗分离纯化工艺研究, Purification strategy of inactivated Foot-and-Mouth Disease Virus[D]. 中国科学院研究生院,2015.
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